Postati sa komunom shizophyllum: stvorite sterilnu kulturu od pronađenih gljiva: 3 koraka (sa slikama)

2024 Autor: John Day | [email protected]. Zadnja izmjena: 2024-01-30 08:08

Ovo uputstvo usredotočeno je na objašnjenje kako stvoriti sterilnu kulturu gljive Schizophyllum Commune (uobičajeni naziv gljiva Split Gill) na Petrijevoj zdjeli koristeći pronađene gljive. Utvrđeno je da komuna Schizophyllum ima više od 28 000 polova, može se naći na svim kontinentima osim na Antarktiku i ima sposobnost (poput ostalih "gljivica bijele i smeđe truleži") razgraditi endokrino ometajuće zagađenje (plastika, oponašanje hormona u industrijskim petrokemijskim proizvodima, poput gnojivo Atrazin, plastifikator Bisfenol-A ili sintetički hormon Dietilstilbestrol).

Preći ću na tehnike identifikacije divljih gljiva, kako napraviti petrijevu zdjelu s hranjivim agarima i kako koristiti pronađene gljive za uzgoj sterilne izolirane kulture u vašoj petrijevoj zdjelici. Ostala uputstva u ovoj seriji prelaze tehnike poput genetske identifikacije gljiva, jednostavnih enzimskih testova za provjeru sposobnosti gljive da razbije plastiku i hormone oponašajući zagađenje, te kako napraviti sir sa S. Commune.

Ovaj projekat je nastao iz zajedničkog rada Mary Maggic, Paula Pin i mene tokom boravka u HANGAR -u u Barseloni, Španija, jesen 2018. godine. Za više informacija o projektu pročitajte na ~~ ili preskočite sve Bla Bla i idite direktno na Step 1 za vodič:)

Slike su iz Fanzine časopisa Schizophyllum Commune ~ datoteke se mogu besplatno preuzeti ovdje

Tokom rezidencije naša tri glavna cilja bila su:

1 ~ Istražite i sažmite naučnu literaturu o Schizophyllum Commune -u i njenim različitim interakcijama s hormonima i endokrinim ometajućim petrokemijskim zagađivačima. S. Commune je jedna od mnogih gljivica "bijele i smeđe truleži" sa sposobnošću razgradnje hormonskog i endokrinog ometajućeg zagađenja. Ove gljive hrane se drvećem izlučivanjem "lignoceluloznih" enzima iz njihovih umreženih tijela ili "micelija", a enzimi mogu razbiti celulozu i lignin od kojeg se drveće sastoji. Zbog strukturnih sličnosti između celuloze, lignina i hormona EDS -a poput Atrazina, BPA, Estradiola, Dietilstilbestrola i Nenilfenola, "lignocelulozni" enzimi koje luče gljive također mogu razgraditi veliki broj toksičnih tvari. Osim toga, S. Commune proizvodi imunostimulacijske polisaharide koji su korisni kao prevencija i liječenje raka (odobreno u Japanu za liječenje raka grlića maternice), mogu poboljšati fitoestrogena svojstva određenih biljaka fermentacijom, mogu se koristiti umjesto sirila i laktobacilija u procese proizvodnje sira i proizvode enzime za otapanje trombinskog ugruška (korisno u liječenju tromboze). Čudno, te iste "beta-glukane" koji se mogu ekstrahirati kipućom vodom kao lijekovi protiv raka i imunostimulansi, također koristi naftna industrija za povećanje prinosa nafte, vezujući S. Commune u bizaarsku povratnu spregu s proizvodnjom endokrinih poremećaja petrohemikalije u stanju je razgraditi i sanirati.

2 ~ Razviti DIY i DIWO (radi s drugima) protokole koji pojednostavljuju ove recepte za rad sa ODG -ovima i gljivama za prevođenje kodificiranog naučnog znanja na jezik koji je pristupačniji. Iskoristite ove recepte za obrazovanje, za ispitivanje, za otpor molekularnim kolonizacijama i stvaranje novih narativa o nastajanju više vrsta i našoj kolektivnoj mutagenezi.

3 ~ Izazovite dominantni cisheteronormativni, queerphobic diskurs koji okružuje endokrine hemikalije koje ometaju (EDC). Citirajući stipendije Malin Ah-King i Eve Hayward o ovim temama: "Mnoge novinske kuće izvještavaju o ovim zastrašujućim endokrinim pričama iz naših dvorišta. U nastojanju da se ova pitanja istaknu-kao što ćemo opisati u nastavku-mediji su osvijetlili Frankensteinovu metamorfozu koji prijeti seksu i seksualnosti. Umjesto rješavanja mnogih drugih zdravstvenih rizika povezanih s izlaganjem toksičnim tvarima, najsenzacionalnija i polemička pitanja predstavljaju debatu i kritički odgovor. Postavlja se pitanje: Zašto je seks važniji od raka, autoimune bolesti, pa čak i smrt? Koji kulturni živci (od kojih su mnogi globalizirani) se pokreću? I, za nas koji imamo feminističke brige, kako preusmjeriti debatu dalje od esencijalizma, seksizma i heteronormativnosti? " (Toksični spolovi).

Schizophyllum Commune je jedinstvena "gljiva bijele truleži" po tome što je utvrđeno da ima preko 28 000 genetskih spolova. Ova adaptacija, koju mnogi teoretiziraju, omogućila je nevjerojatnu genetsku raznolikost ove vrste koja postoji na svim kontinentima u svijetu osim na Antarktiku. Željeli smo slaviti prekrasnu seksualnu raznolikost ovog organizma kao jedan primjer čudnosti biologije. Dominantni diskurs koji okružuje ODG u medijima, pa čak i od aktivista za zaštitu okoliša, snažno se fokusira na nenaučne narative, da ti molekuli uzrokuju određene seksualnosti ili rodove koje naše društvo patologizira, označava kao nestandardne i često nastoje ukloniti ili izbjeći. Ne samo da je seksualno paničan, queer fobičan fokus negodovanja javnosti zbog znanstveno nerealnog EDC-a (hormoni i endokrini poremećaji ne čine ljude čudnima ili transima), već zanemaruje sve razorno stvarne efekte koje možemo povezati s EDC-om: pretilost, poremećaji štitnjače, određeni karcinomi, među ostalim zdravstvenim rizicima.

Korak 1: Pronađite komunu Schizophyllum koja živi u vašoj zajednici

Sterilne kulture laboratorija razreda Schizophyllum Commune mogu se kupiti za oko 350 USD u mikrobiološkoj banci za kulturu, poput ATCC … zbog čega smo se besplatno odlučili za uzgoj iz divljih gljiva:)

Bilo mi je lako jer sam čitala o Schizophyllum Commune -i i slučajno sam primijetila kako jednog dana raste na drvetu ispred mog stana. Ako nemate tu sreću da ste slučajno naišli na S. Commune u svom susjedstvu, poželjet ćete otići u šumovito područje u potrazi za gljivama "bracket" koje rastu na bolesnom drveću tvrdog drveta (drveće koje izgleda kao da ne radi previše dobro) ili oboreno drveće. S. Commune jedna je od najčešćih postojećih gljiva u svijetu i može se naći u osnovi bilo gdje na tvrdom drveću za uzgoj.

Mushroomobserver.org pruža sjajan detaljan opis gdje i kada ćete vjerojatno pronaći S. Commune, kao i kako ga identificirati i kako izbjeći "sličnost" koja bi mogla dovesti do pogrešne identifikacije:

"IDENTIFIKACIJA: Općina Schizophyllum lako se prepoznaje po rascijepljenim škrgama, gustoj dlaci i kapici u obliku lepeze. Kapa je široka 1-4,5 cm i obično ima školjku ili oblik lepeze sa sivom do bjelkastom površinom. Bazidiospore su 5-7,5 × 2 -3 mikrometra. Slična gljiva poznata kao "Crimped Gill" Plicaturopsis crispa nije toliko rasprostranjena.

STANIŠTE: Općina Schizophyllum raste na tvrdom drvetu koristeći enzime za razgradnju lignina i uzrokuje "bijelu trulež". Tako se nalazi u većini šumovitih područja. Može se naći tijekom cijele godine zbog svoje sposobnosti da se osuši, rehidrira u boljim uvjetima, a zatim nastavi sporulaciju.

Ova gljiva može parazitirati na drveću malog promjera koje je pod stresom drugih faktora, poput suše.

IZGLEDAJTE SLIČNO: Plicaturopsis crispa ili "uvijena škrga" slična je splitskoj škrgi. Takođe ima plodište u obliku ljuske/lepeze. Međutim, kapa je crvenkastosmeđa ili žutosmeđa, a donja strana je vrlo prepoznatljiva. Ima zgnječene vene poput škrga koje se znatno razlikuju od rascjepljenih škrga u općini Schizophyllum. Obložena škrga je rjeđa, ali prepoznatljiva kada se pronađe."

Korak 2: Napravite hranjive agarske ploče za S. Commune da rastu

Da biste izolirali kulturu zajednice S. Commune za koju ste saznali da će vam trebati petrijevke napunjene hranom za gljive. Ekstrakt slada Agar je jednostavna hrana za S. Commune ili "hranjivi medij" koji se može napraviti od lako dostupnih sastojaka. Također je dobar izvor hrane za korištenje u eksperimentima enzimatskog testa sa S. Commune i drugim gljivama bijele ili smeđe truleži ~~ ovaj proces će biti opisan u drugom uputstvu.

NUSPOMENA: Ako ste imali problema s pronalaskom S. Commune, u istoj porodici postoji mnogo drugih gljiva koje se mogu uzgajati istim postupcima i jednako su dobre, ako ne i bolje, u razgradnji zagađivača koji ometaju endokrini sustav. Ćureći rep (Trametes Versicolor) pronađen je u mnogim studijama koje su gledale na stotine gljiva bijele i smeđe truleži kao najveće proizvođače "lignoceluloznih" enzima koji razgrađuju petrokemijsko zagađenje. Bukovače su takođe vrlo dobre u tome.

Radim svoj mikrobiološki rad u laboratoriju za biologiju zajednice pod nazivom BUGSS (Baltimorski podzemni naučni prostor) gdje imam pristup staklenom posuđu, digitalnim vagama, diplomiranim cilindrima, autoklavu (za sterilizaciju medija toplinom i pritiskom) itd. Ovakve laboratorije imaju pojavio se u cijelom svijetu u posljednjoj deceniji, pa biste trebali provjeriti ovu listu da vidite ima li u vašoj blizini. Ako nemate sjajnu laboratoriju poput ove u svom području, morat ćete uložiti u neku osnovnu opremu za ovaj proces, poput:

1 ~ Digitalna vaga za precizno mjerenje sastojaka

2 ~ Lonac pod pritiskom za sterilizaciju medija toplinom i parom

3 ~ Petrijeve posude, koje se mogu kupiti na Internetu prilično jeftino, staklo za višekratnu upotrebu ili plastika za jednokratnu upotrebu će raditi, ali je višekratna upotreba uvijek bolja:)

4 ~ Stakleno posuđe za miješanje sastojaka, sterilizaciju i skladištenje.

Ako ne želite ulagati u tu opremu, možete pronaći unaprijed izlivene agar ploče s ekstraktom slada za kupnju na web stranicama poput Amazona ~ dugoročno će biti samo skuplje ako planirate nastaviti raditi na mikrobiologiji.

Već postoji mnogo sjajnih vodiča i YouTube videozapisa o tome kako sami napraviti petrijeve posude s hranjivim medijima. Umjesto da ulazim u detalje o ovome, povezat ću se samo s par - i dati recept za 2% agar ekstrakta slada, koji je hranjivi medij koji ćete koristiti.

Svježe gljive: Vodič o tome kako napraviti ploče od agara za uzgoj gljiva kod kuće

Mykoweb: Početak uzgoja gljiva

List sa tehničkim podacima o ekstraktu slada

2% ekstrakt slada (MEA) ~~ Recept za 1 litru:

20 g ekstrakta slada (uobičajena zaliha za proizvodnju piva, može se kupiti na mreži)

15 g agara (sredstvo za učvršćivanje - koristi se za kuhanje često pa se može kupiti na mreži ili u nekim trgovinama)

1 litar H20 (obično koristim vodu za reverznu osmozu koja se može kupiti u većini trgovina u galonima)

Ovaj se recept može lako izmijeniti ako želite napraviti manje količine. Na primjer, često pravim samo 250 ml odjednom, pa na kraju koristim samo 5 grama ekstrakta slada, 3,75 grama agara i 250 ml vode.

Korak 3: Inokulirajte svoje Petrijevo jelo gljivama

Gljiva koju vidite naziva se „plodonosno tijelo“, to je samo mali dio organizma. Većina njegovog tijela skrivena je u drvetu (ili u zemlji), konzumirajući drvo. Ovaj dio gljive naziva se micelij. Za uzgoj bijelog vlaknastog, šesterokutnog, rizomatskog, rizomatskog, micelijskog tijela Schizophyllum Commune na Petrijevoj zdjelici, uzet ćete uzorak stabljike, sterilizirati i staviti na MEA ploče. Micelij će izrasti iz sterilisanog uzorka jezgre stabljike gljive i kolonizirat će Petrijevu zdjelicu, izgledajući kao bijela pamučna prostirka.

Trebat će vam:

• Agar ploče s ekstraktom slada (MEA) koje ste pripremili u prethodnom koraku
• 70% izopropil alkohola (alkohol za trljanje) i bočica s raspršivačem
• Papirni ubrusi
• Skalpel ili samo brijač od nehrđajućeg čelika - rezač kutija će raditi
• metalne pincete
• rukavice
• Plamen - koristim alkoholnu svjetiljku za sterilizaciju instrumenata, NonDisjunction ima odličan vodič o tome kako ga napraviti ovdje.
• Sterilna površina za rezanje (upravo sam za to koristila sterilnu petrijevu zdjelu)
• Parafilm, parafinski film koji se koristi za zatvaranje petrijevih zdjelica - možete koristiti i samoljepljivu traku ako nemate ovu

STERILNA TEHNIKA:

Glavna stvar koju želite imati na umu kada pokušavate koristiti sterilnu tehniku je da bakterije i spore neprestano padaju u zrak, pa želite držati svoje Petrijeve zdjele pokrivene što je više moguće. Kada podignete poklopce za sipanje medija ili cijepite, uvijek je najbolje držati poklopac neposredno iznad posude, omogućavajući vam horizontalni pristup iznutra, ali držeći poklopac iznad posude kako biste spriječili ulazak bakterija. Drugo, su ogromni konglomerat ljudskih, bakterijskih, gljivičnih i drugih organizama ~~ iako to ne možete vidjeti, okruženi ste gustim oblakom mikroba koji se difundiraju iz vašeg tijela. Umjesto da samo sjedite na površini vaše kože, vaš mikrobiom se pruža u zrak ~~ takooooooo, nemojte nikada mahati rukama nad petrijevom zdjelicom ili se naginjati nad otvorenu zdjelu da pogledate. I nosite rukavice ako imas ih;)

POSTAVITE POLUSTERILNI RADNI PROSTOR

Odaberite neporoznu radnu površinu bez ostataka i smeća. Poprskajte područje dolje sa 70% otopinom izopropilnog alkohola i obrišite ga papirnatim ubrusom. Postavite svoj plamen u središte svog radnog područja i zapalite ga. Radit ćete što je moguće bliže plamenu jer stvara malo sterilno polje oko njega. Postavite MEA ploče s jedne strane, a uzorak gljive na sterilnu površinu za rezanje s druge strane. Obično koristim sterilnu petrijevu zdjelu kao svoju sterilnu površinu za rezanje, kao i oslonac za alat. Sipajte malo izopropilnog alkohola u malu čašu - ovo ćete koristiti za sterilizaciju oštrice i pincete tokom rada.

*¡~ INOCULATE ~!*

Prije nego učinite bilo što, sterilizirajte oštricu i pincetu tako što ćete ih umočiti u izopropilnu alku, a zatim ih malo držati iznad plamena. Nakon sterilizacije, postavite ih na sterilnu površinu za rezanje ako ih odložite. Pincetom držite stabljiku gljive mirno i odrežite joj komad. Uzmite ovaj komad i izrežite sve strane tako da na kraju dobijete malu kocku jezgre stabljike gljiva sa uklonjenim svim vanjskim površinama. Ovo pomaže da se riješite svih ostalih mikroba koji žive na gljivama kako ne bi kontaminirali vašu kulturu. Zatim umočite jezgru stabljike u izopropil na oko 30 sekundi, izvucite je i pustite da se osuši unutar sterilnog polja plamena (nemojte koristiti plamen da ga osušite, jer će to ubiti gljivu). Ponovno sterilizirajte pincetu plamenom dok čekate da se jezgra stabljike osuši. Zatim jednostavno podignite poklopac jedne od vaših MEA ploča samo toliko da uvučete pincetu sa strane, pa pomoću sterilisane pincete postavite jezgru stabljike u središte ploče. Zatvorite ploču parafilmom i u narednih nekoliko sedmica trebali biste vidjeti S. Commune micelij koji kolonizira ploču.

Obično napravim nekoliko ploča dok radim s divljim uzorcima, tako da ako dobijem kontaminaciju, veća je vjerojatnost da ću imati barem jednu čistu kulturu.